Cambios morfofuncionales de los espermatozoides y factores de riesgo asociados a la infertilidad masculina

Introducción: En la actualidad muchos estudios han mostrado un declinar en la calidad del semen humano y un riesgo incrementado de subfertilidad masculina. Objetivo: Evaluar el grado de asociación de los cambios morfofuncionales de los espermatozoides con los factores de riesgo en la infertilidad masculina. Métodos: Se realizó un estudio descriptivo transversal a los 123 pacientes con alteraciones en el espermograma que acudieron al Centro Territorial de Atención a la Pareja Infértil de la provincia Holguín en el año 2021 que cumplían con los criterios de inclusión y exclusión establecidos. La información fue obtenida a partir de la revisión de las historias clínicas y la realización de un cuestionario. Se utilizó la prueba de correlación de Spearman para identificar la relación entre las variables estudiadas a un nivel de significancia (=0,05. Resultados: La teratozoospermia fue el cambio morfofuncional que predominó con 69 casos (56,09 %), al ser más frecuente en el grupo de edad de 30 a 39 años (22, 76 %), la exposición a temperaturas elevadas con 19,51 % y el varicocele con un 43,9 %. En la correlación de las variables estudiadas mostró una mayor asociación la malnutrición por exceso y la teratozoospermia en 44 pacientes. Conclusiones: La evaluación de los cambios morfofuncionales de los espermatozoides permitió́ conocer un predominio de los relacionados a la morfología. Factores de riesgo como la edad mayor de 30 años, la malnutrición por exceso, la exposición a altas temperaturas y el varicocele se asocian a la infertilidad masculina.

Introduction: As of the present moment many studies have evidenced a decline in the quality of the human semen and an incremented risk masculine sub-fertility. Objective: To evaluate the association's grade of the morphologic and functional changes of the spermatozoa with the risk factors in the masculine infertility. Methods: A descriptive transverse study was carried out in the 123 patients with alterations in the spermogram attended in the Territorial Center of Attention to the Infertile Couple in Holguín in the year 2021, and that fulfilled the established criteria of inclusion and exclusion. The information was gotten from the revision of the case histories and the realization of a questionnaire. Spearman's correlation to identify the relation between the studied variables was used. Results: The teratozoospermia was the morphofunctional change that predominated with 69 cases (56.09 %), being more frequent in the age bracket of 30 to 39 years (22 for a 76 %), the exposition to temperatures raised with 19.51 % and the varicocele with a 43.9 %. The malnutrition for excess and teratozoospermic in 44 patients evidenced a bigger association in the correlation of the studied variables. Conclusions: The evaluation of the changes allowed morphologic and functional of spermatozoa knowing a predominance of the related to the morphology. Risk factors like an age older than 30 years, the malnutrition for excess, the exposition to loud temperatures and the varicocele correlate to the masculine infertility.

Chronic consumption of contaminated feed with 2 4 dichlorophenoxyacetic acid (2 4 D) herbicide in rodents: effects on male reproductive health / Consumo crônico de ração contaminada com herbicida ácido 2 4 di clorofenoxiacético (2 4 D) em roedores: efeitos na saúde reprodutiva masculina

Introduction: The herbicide 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) is one of the most widely used pesticides in the world. There is evidence that this herbicide can induce deleterious effects in non-target organisms, including impairment of reproduction function. Objective: The aim of this study was to evaluate the reproductive effects of the chronic consumption of contaminated feed with 2,4-D in rats using food environmental spraying simulation. Methods: Animals orally exposed received nebulized chow with 2,4-D solution in different concentrations for 180 days: 0 (control - CG), 20.69 (LCG), 34.63 (MCG), or 51.66 ppm day−1 (HCG). Results: Sperm quality was impaired to 2,4-D. The percentage of sperm with progressive movement, number of sperm in the testis and daily sperm production were decreased in all exposed groups to the herbicide compared to CG. Sperm counts in the caput/corpus and cauda epididymis were reduced in MCG and HCG, and sperm transit time was delayed in the epididymis of LCG. There was a negative impact on sperm morphology and plasma membrane integrity in MCG and HCG, respectively. Germ cell exfoliation within the lumen of the seminiferous tubules and epithelial vacuolization in epididymis were found in the HCG. Conclusion: This is the first study to describe the negative impact on male reproductive morphophysiology after chronic exposure to 2,4-D using food nebulization in environmentally relevant concentrations, based on agronomic use of the herbicide. The reproductive injuries identified raise concerns about the impacts of wide population exposure to 2,4-D (AU).

Introdução: O herbicida 2,4- ácido diclorofenoxiacético (2,4-D) é um dos agrotóxicos mais utilizados no mundo. Há evidências de que este herbicida pode induzir efeitos deletérios em organismos não-alvo, incluindo prejuízo na função reprodutiva. Objetivo: O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos reprodutivos do consumo crônico de ração contaminada com 2,4-D em ratos, utilizando simulação de pulverização ambiental de alimentos. Métodos: Animais expostos oralmente receberam ração nebulizada com solução de 2,4-D em diferentes concentrações por 180 dias: 0 (controle - GC), 20,69 (LCG), 34,63 (MCG) ou 51,66 ppm dia−1 (HCG). Resultados: A qualidade espermática foi prejudicada pelo 2,4-D. A porcentagem de espermatozoides com movimento progressivo, número de espermatozoides no testículo e produção diária de espermatozoides foram menores em todos os grupos expostos ao herbicida, quando comparados ao GC. A contagem de espermatozoides na cabeça/corpo e cauda do epidídimo foi reduzida em MCG e HCG, e o tempo de trânsito espermático atrasou no epidídimo em LCG. Houve impacto negativo na morfologia espermática e na integridade da membrana plasmática em MCG e HCG, respectivamente. Esfoliação de células germinativas no lúmen dos túbulos seminíferos e vacuolização epitelial no epidídimo foram encontradas em HCG. Conclusão: Este é o primeiro estudo a descrever o impacto negativo na morfofisiologia reprodutiva masculina após exposição crônica ao 2,4-D, utilizando nebulização de alimentos em concentrações ambientalmente relevantes, com base no uso agronômico do herbicida. As lesões reprodutivas identificadas levantam preocupações sobre os impactos da ampla exposição da população ao 2,4-D (AU).

Preservação de fertilidade: cultivo de folículos ovarianos e novo dispositivo para criopreservação seminal / Fertility preservation: ovarian follicle culture and a new device for seminal cryopreservation

INTRODUÇÃO: A oncofertilidade tem o desafio de buscar estratégias para preservar a função reprodutiva. Este estudo explorou duas possibilidades como implementação para as técnicas de preservação da fertilidade feminina e masculina. OBJETIVO: Analisar a eficiência do cultivo de folículos pré-antrais de camundongos suplementado com lisado de plaquetas humanas e desenvolver um protótipo para criopreservação de sêmen humano. MATERIAIS E MÉTODOS: Os folículos pré-antrais foram isolados mecanicamente de ovários de fêmeas de camundongos e foram cultivados individualmente em sistema entre camadas de óleo mineral. Os folículos foram cultivados divididos em 4 grupos, sendo um controle, sem o uso do lisado de plaquetas e três grupos com diferentes concentrações de lisado de plaquetas humanas (PLTMax®). Foram avaliadas a sobrevivência celular, desenvolvimento folicular e características oocitárias. Para o segundo estudo foi desenvolvido e impresso em 3D com filamentos de acrilonitrilo butadieno-estireno (ABS) um protótipo que suporte 10 palhetas com amostras seminais no vapor de nitrogênio líquido (N2L), etapa essencial para criopreservação de sêmen humano. Para os testes foram utilizadas 40 amostras seminais. A temperatura ambiente e no interior das palhetas de envase das amostras foram medidas e estabelecida a curva de resfriamento. Os parâmetros de motilidade, vitalidade e fragmentação do DNA espermático foram avaliados antes do congelamento e após o descongelamento. Foram realizados dois testes, um de posicionamento das palhetas e outro comparativo entre o protótipo e um dispositivo com suporte em poliestireno expandido (EPS). RESULTADOS: O cultivo de 11 dias induziu um aumento no tamanho folicular em todas as condições, sendo maior no grupo controle, seguido do grupo com 10% de PLTMax®, mas com diferença significativa (p<0,001). O grupo controle apresentou maior número de oócitos intactos (>50%) em relação aos demais (<35%). Todos os 4 grupos apresentaram taxas de vitalidade celular acima de 70%. Quanto aos testes com o protótipo em ABS foi verificado que as curvas de refrigeração foram notavelmente reproduzíveis. O material do protótipo resistiu a inúmeros mergulhos (>300) no N2L, sem demonstrar danos ao material. Diferenças significativas (p<0,001) foram observadas para a taxa de recuperação média da motilidade e vitalidade espermática em relação aos dados da amostra 2 fresca em ambos os testes. A motilidade, a vitalidade e a fragmentação do DNA espermático antes do congelamento e após o descongelamento não mostraram diferenças em relação a posição das palhetas. Também não houve diferença quanto ao índice de fragmentação verificada das amostras criopreservadas com uso do protótipo em ABS e o suporte em EPS, mesmo após o cultivo, após 24 horas de cultivo. Contudo, houve diferença em relação a amostra fresca (p<00,1). Quanto a recuperação das taxas de motilidade e vitalidade não houve diferença entre o ABS e EPS após o descongelamento e 24 horas de cultivo. CONCLUSÃO: O PLTMax®, embora tenha apresentado menor desempenho que o HSA, é um candidato de suplementação para o cultivo de folículos pré-antrais que merece ser mais explorado. O protótipo em ABS demonstrou resistência, praticidade e segurança para criopreservação seminal de forma reprodutível e eficiente.

INTRODUCTION: Oncofertility has the challenge of seeking strategies to preserve reproductive function. This study explored two possibilities as implementations for female and male fertility preservation techniques. PURPOSE: To analyze the efficiency of mouse preantral follicle culture supplemented with human platelet lysate and to develop a prototype for human semen cryopreservation. MATERIAL AND METHODS: Preantral follicles were mechanically isolated from female mouse ovaries and were individually cultured using a mineral oil interlayer system. The follicles were cultured divided into 4 groups, one control, without the use of platelet lysate and three groups with different concentrations of human platelet lysate (PLTMax®). Cell survival, follicular development and oocyte characteristics were evaluated. For the second study, a prototype was developed and printed in 3D with acrylonitrile butadiene styrene (ABS) filaments to support 10 straws with seminal samples in liquid nitrogen (N2L) vapor, an essential step for human semen cryopreservation. For the tests 40 seminal samples were used. Ambient and internal temperatures inside the sample straws were measured and the cooling curve was established. The parameters of motility, vitality and sperm DNA fragmentation were evaluated before freezing and after thawing. Two tests were performed, one for positioning the straws and the other comparing the prototype and a device with expanded polystyrene (EPS) support. RESULTS: The 11-day culture induced an increase in follicular size in all conditions, being higher in the control group followed by the group with 10% PLTMax®, but with significant difference (p<0.001). The control group presented a higher number of intact oocytes (>50%) compared to the others (<35%). All 4 groups presented cell vitality rates above 70%. As for the ABS prototype tests, it was verified that the cooling curves were remarkably reproducible. The prototype withstood numerous dips (>300) in N2L without showing damage to the material. Significant differences (p<0.001) were observed for the mean recovery rate of sperm motility and vitality compared to the fresh sample data in both tests. Motility, vitality and sperm DNA fragmentation before freezing and after thawing showed no differences with respect to the position of the straws. There was also no difference in the fragmentation index verified for samples cryopreserved using the ABS prototype and the EPS support, even after 24 hours of culture. However, there was a difference compared to the fresh 4 sample (p<00.1). As for the recovery of motility and vitality rates there was no difference between ABS and EPS after thawing and 24 hours of culture. CONCLUSION: PLTMax®, although it showed lower performance than HSA, is a supplementation candidate for preantral follicle culture that deserves further exploration. The ABS prototype demonstrated strength, practicality and safety for seminal cryopreservation in a reproducible and efficient manner.

Actualización sobre COVID-19 e histofisiología del sistema reproductor masculino / Update on COVID-19 and histophysiology of the male reproductive system

RESUMEN: La reciente pandemia de la COVID-19 ha sacudido a la sociedad teniendo una importante repercusión en el campo de la salud y de la investigación. Dada su relevancia, se han llevado a cabo estudios sobre los efectos del SARS-CoV-2 en la fisiología humana. En concreto, sobre la posible presencia y transmisión del virus a través del sistema reproductor masculino y su posible efecto en el éxito reproductivo. Conocer si la presencia del virus altera los órganos responsables del desarrollo y maduración de las células de la serie espermatogénica podría revelarnos su implicación en la calidad seminal. Por ello, nos planteamos esta revisión, con el fin de analizar las principales evidencias científicas sobre los efectos del SARS-CoV-2 en la histofisiología del sistema reproductor masculino y sobre la capacidad fecundante de los espermatozoides.

SUMMARY: The recent COVID-19 pandemic has shaken up society, having a significant impact on the field of health and research. Given its relevance, studies have been performed on the effects of SARS-CoV-2 on human physiology. In particular, the possible presence and transmission of the virus through the male reproductive system could affect reproductive success. Knowing if the presence of the virus disrupts the organs responsible for the development and maturation of the cell lines involved in spermatogenesis could reveal its implications in sperm quality. For that reason, we proposed this review, in order to analyze the main scientific evidence on the effects of SARS-CoV-2 on the histophysiology of the male reproductive system and sperm fertilizing capacity.

Efecto de etilenglicol y leche en polvo en la criopreservación de semen de bocachico Prochilodus magdalenae / Effect of ethylene glycol and milk powder in the cryopreservation of bocachico semen Prochilodus magdalenae

RESUMEN Bocachico Prochilodus magdalenae es una especie endémica y la más importante de la pesquería continental colombiana. No obstante, sus capturas han disminuido aproximadamente el 67% en los últimos cuarenta años, por tanto ha sido categorizada como vulnerable a la extinción. La criopreservación de semen, es una herramienta biotecnológica de conservación por tanto el objetivo del presente estudio fue evaluar la criopreservación de semen de bocachico con etilenglicol (EG) y leche en polvo descremada (LP). La solución crioprotectora estuvo compuesta por EG (6, 8 o 10%), LP (3, 5 o 7%) y glucosa 6%. La calidad del semen descongelado se evaluó con un software tipo CASA (computer assisted semen analysis). El porcentaje de inclusión de EG, no afectó significativamente ninguno de los parámetros de calidad seminal evaluados (p>0,05), a excepción de la tasa de eclosión (p<0,05); mientras que, la LP afectó significativamente el porcentaje de espermatozoides estáticos (p<0,05) y las tasas de fertilización y eclosión (p<0,01). La mayor movilidad total se obtuvo cuando EG se incluyó a 10% y la LP a 7% (38,4±18,4%) (p<0,05); pero las mayores tasas de fertilización (54,3-64,2%) y eclosión (47,7-57,5%) se obtuvieron cuando EG se incluyó a 6 u 8% y la LP se incluyó a la menor concentración evaluada (3%), sin observarse diferencia significativa entre estos tratamientos (p>0,05). Los resultados permiten concluir que la combinación EG 6% con LP 3% permiten la criopreservación de semen de Prochilodus magdalenae de buena calidad y capacidad fecundante.

ABSTRACT Bocachico Prochilodus magdalenae is an endemic species and the most important of the Colombian continental fishery. Its catches have decreased by approximately 67% in the last forty years and, it has been categorized as extinction vulnerable. Semen cryopreservation is a biotechnological conservation tool; therefore, the aim of this study was to evaluate bocachico semen's cryopreservation with ethylene glycol (EG) and skimmed milk powder (LP). The cryoprotective solution was composed of EG (6, 8 or 10%), LP (3, 5 or 7%) and glucose at 6%. The quality of the thawed semen was evaluated with CASA software (computer assisted semen analysis). The inclusion percentage of EG did not significantly affect any of the evaluated semen quality parameters (p>0,05), except for the hatching rate (p <0.05). In contrast, LP presented significant effects on the percentage of static sperm (p <0,05) and on fertilization and hatching rates (p<0,01). The highest total motility was achieved with EG included at 10% and the LP 7% (38,4±18,4%) (p<0,05); but the highest fertility rates (54,3-64,2%) and hatching (47,7-57,5%) were registered when EG included at 6 or 8% and LP included at the lowest rate evaluated (3%), no significant difference was observed between these treatments (p>0,05). The results allow us to conclude that the combination EG 6% with LP 3% allows the cryopreservation of Prochilodus magdalenae semen of good quality and fertilizing capacity.

Improving Implantation Rate in 2nd ICSI Cycle through Ovarian Stimulation with FSH and LH in GNRH Antagonist Regimen / Melhorando a taxa de implantação no 2° ciclo de ICSI através do estímulo ovariano com FSH e LH no regime com antagonista do GnRH

Abstract Objective To investigate whether patients with a previous recombinant follicle stimulating hormone (rFSH)-stimulated cycle would have improved outcomes with rFSH + recombinant luteinizing hormone (rLH) stimulation in the following cycle. Methods For the present retrospective case-control study, 228 cycles performed in 114 patients undergoing intracytoplasmic sperm injection (ICSI) between 2015 and 2018 in an in vitro fertilization (IVF) center were evaluated. Controlled ovarian stimulation (COS) was achieved with rFSH (Gonal-f, Serono, Geneva, Switzerland) in the first ICSI cycle (rFSH group), and with rFSH and rLH (Pergoveris, Merck Serono S.p.A, Bari, Italy) in the second cycle (rFSH + rLH group). The ICSI outcomes were compared among the groups. Results Higher estradiol levels, oocyte yield, day-3 high-quality embryos rate and implantation rate, and a lower miscarriage rate were observed in the rFSH + rLH group compared with the rFSH group. In patients < 35 years old, the implantation rate was higher in the rFSH + rLH group compared with the rFSH group. In patients ≥ 35 years old, higher estradiol levels, oocyte yield, day-3 high-quality embryos rate, and implantation rate were observed in the rFSH + rLH group. In patients with ≤ 4 retrieved oocytes, oocyte yield, mature oocytes rate, normal cleavage speed, implantation rate, and miscarriage rate were improved in the rFSH + rLH group. In patients with ≥ 5 retrieved oocytes, higher estradiol levels, oocyte yield, and implantation rate were observed in the rFSH + rLH group. Conclusion Ovarian stimulation with luteinizing hormone (LH) supplementation results in higher implantation rates, independent of maternal age and response to COS when compared with previous cycles stimulated with rFSH only. Improvements were also observed for ICSI outcomes and miscarriage after stratification by age and retrieved oocytes.

Resumo Objetivo: Investigar se há algum efeito da suplementação com hormônio luteinizante (LH, na sigla em inglês) no regime com antagonista do hormônio liberador de gonadotropina (GnRH, na sigla em inglês) sobre os resultados dos ciclos consecutivos de injeção intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI, na sigla em inglês). Métodos Para o presente estudo retrospectivo de caso-controle, foram avaliados 228 ciclos de microinjeção intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI, na sigla em inglês) realizados em 114 pacientes entre 2015 e 2018 em um centro privado de fertilização in vitro (FIV) afiliado a uma universidade. O estímulo ovariano controlado (EOC) foi feito com hormônio folículo- estimulante recombinante (rFSH, na sigla em inglês) (Gonal-f, Serono, Genebra, Suíça) no primeiro ciclo de ICSI (grupo rFSH), e com rFSH e rLH (Pergoveris, Merck Serono S.p.A, Bari, Itália) no segundo ciclo (grupo rFSH + rLH). Os desfechos dos ciclos de ICSI foram comparados entre os grupos. Resultados Níveis mais elevados de estradiol, de recuperação oocitária, taxa de embriões de alta qualidade no 3° dia e taxa de implantação, e menor taxa de aborto foram observados no grupo rFSH + rLH. Em pacientes < 35 anos, a taxa de implantação foi maior no grupo rFSH + rLH em comparação com o grupo rFSH. Em pacientes com ≥ 35 anos, maiores níveis de estradiol, recuperação oocitária, a taxa de embriões de alta qualidade no 3° dia e a taxa de implantação foram observados no grupo rFSH + rLH. Em pacientes com baixa resposta ao EOC (≤ 4 oócitos recuperados), a recuperação oocitária, a taxa de oócitos maduros, a taxa de velocidade normal de clivagem, a taxa de implantação e a taxa de aborto foram melhoradas no grupo rFSH + rLH. Em pacientes com resposta normal ao EOC (≥ 5 oócitos recuperados), níveis mais elevados de estradiol, recuperação oocitária e taxa de implantação foram observados no grupo rFSH + rLH. Conclusão A estimulação ovariana com suplementação de LH resultou em taxas de implantação mais altas, independentemente da idade materna e da resposta ao EOC, em comparação com os ciclos anteriores estimulados apenas com rFSH. Melhorias também foram observadas nos resultados da ICSI e na taxa de aborto quando as pacientes foram estratificadas por idade e número de oócitos recuperados.

Lentivirus vectors fail to deliver transgenes into bovine zygotes after co-incubation with sperm during in vitro fertilization / [Lentivírus falham na entrega de transgenes em zigotos bovinos após coincubação com espermatozoide, durante fertilização in vitro]

As vantagens dos animais transgênicos têm sido demonstradas em diferentes aplicações, entretanto muitas metodologias usadas para gerar animais geneticamente modificados (GM) apresentam baixas taxas de eficiência. O objetivo deste estudo foi avaliar a entrega dos vetores lentivirais (VLs) em zigotos durante a fertilização in vitro (FIV), para gerar embriões GM, com o gene da proteína verde fluorescente (GFP) ou do fator IX de coagulação humana (FIX). Vetores lentivirais com os genes GFP (pLGW-GFP-LV) ou FIX (pLWE2-FIX-LV) foram utilizados na FIV ou na cultura de embriões in vitro (CIV). A coincubação de pLWE2-FIX-LV com espermatozoides e complexos oócitos-células do cumulus (COCs) durante a FIV diminuiu (P<0,05) as taxas de clivagem e de blastocistos, enquanto com pLGW-GFP-LV diminuiu (P<0,05) a taxa de blastocisto quando se comparou ao controle sem VL. A coincubação de pLWE2-FIX-LV e pLGW-GFP-LV com presumíveis zigotos durante a CIV não afetou (P>0,05) o desenvolvimento embrionário. A expressão da proteína GFP não foi detectada em embriões após a coincubação de FIV ou CIV, embora as células do cumulus expressassem a proteína até o dia oito de cultivo in vitro. Reações em cadeia da polimerase (PCR) não detectaram os genes GFP ou FIX em embriões, mas ambos foram detectados em células do cumulus. Assim, a coincubação de VL com espermatozoide bovino e COCs não é eficaz para produzir embriões geneticamente modificados por meio de FIV.(AU)

Efecto de la borra de café sobre la biológica espermática: aproximación in vitro / Effect of spent coffee grounds on sperm biology: in vitro approach

OBJETIVO: El objetivo de este trabajo fue establecer el efecto de la borra de café sobre la movilidad y los parámetros funcionales de los espermatozoides humanos in vitro. MATERIALES Y MÉTODOS: La borra de café, un subproducto obtenido en establecimientos especializados en la preparación de café soluble a base de grano, se diluyo en tampón fosfato salino y se mezcló en proporciones iguales con las muestras de semen de 16 voluntarios aparentemente sanos. A cada muestra se le determinó el efecto sobre la movilidad espermática en función del tiempo (30, 60, 90 y 120 minutos, n=16) y sobre los parámetros funcionales (n=6) por medio de citometría de flujo: potencial de membrana mitocondrial, producción de especies reactivas de oxígeno y lipoperoxidación de la membrana espermática. RESULTADOS: La incubación de los espermatozoides con la borra de café evidencio un cambio positivo en la movilidad espermática. Adicionalmente, la incubación con la borra de café incremento significativamente el potencial de membrana mitocondrial en los espermatozoides. CONCLUSIÓN: La borra de café, seguramente debido a los compuestos antioxidantes, afecta positivamente la movilidad espermática aumentando el potencial de membrana mitocondrial. Por lo tanto, esto es un paso inicial en la búsqueda de un suplemento de origen natural que aumente la calidad seminal.

OBJECTIVE: The objective of this work is to establish the effect of spent coffee grounds on the motility and functional parameters of human spermatozoa, in vitro. MATERIALS AND METHODS: Spent coffee grounds, a by-product obtained in specialized establishments in the preparation of soluble coffee based on grain, was diluted in saline phosphate buffer and mixed in equal proportions with semen samples from 16 apparently healthy volunteers. Each sample was determined the effect on sperm motility as a function of time (30, 60, 90 and 120 minutes, n=16) and on functional parameters (n=6) by means of flow cytometry: mitochondrial membrane potential, reactive oxygen species production and membrane lipoperoxidation. RESULTS: The incubation of the spermatozoa with the spent coffee grounds showed a positive change in sperm motility. Additionally, incubation with spent coffee grounds significantly increased the mitochondrial membrane potential in human sperm cells. CONCLUSION: Spent coffee grounds, probably due to antioxidant compounds, positively affects sperm motility by increasing mitochondrial membrane potential. Therefore, this is an initial step in the search for a supplement of natural origin that increases seminal quality.

Padronização do Sperm Class Analyzer® (SCA®) para avaliação de espermatozoides equinos criopreservados / [Standardization of the Sperm Class Analyzer® (SCA®) for the evaluation of cryopreserved equine sperm]

Objetivou-se, no primeiro experimento, avaliar o efeito da velocidade de captura de imagens de 25Hz, 30Hz e 50Hz na cinética dos espermatozoides equinos criopreservados. Todas as velocidades mostraram-se adequadas para capturar o movimento espermático (P>0,05). No segundo experimento, objetivou-se avaliar o efeito da deposição de sêmen em lâmina sob lamínula, Leja®10 e 20, na cinética espermática. O uso de lâmina e lamínula foi superior às lejas para manter a LIN e o WOB (P<0,05). No terceiro experimento, objetivou-se avaliar o efeito das concentrações de 25, 50 e 100x106 na cinética espermática. As concentrações de 25 e 50 x106 foram superiores a 100x106 para preservar a LIN, a STR e a BCF e não afetar negativamente a motilidade (P<0,05). No quarto experimento, objetivou-se avaliar o efeito dos diluidores BotuCrio®, BotuSêmen®, TALP sperm e da solução fisiológica na cinética espermática. O BotuCrio® foi superior a todos os diluidores em preservar a BCF e os hiperativos (P<0,05). Conclui-se que o emprego da velocidade de captura entre 25 e 50Hz, a deposição do sêmen entre lâmina e lamínula e a rediluição em diluidor de congelação para atingir 25 a 50x106 de espermatozoides/mL são ideais para o SCA® avaliar, de forma fidedigna, o sêmen equino criopreservado.(AU)

The objective of the first experiment was to evaluate the effect of 25, 30 and 50Hz frame acquisition rate on equine cryopreserved sperm. All frame acquisition rates tested were adequate to capture the sperm movement (P>0.05). The aim of the second experiment was to evaluate the effect of chambers, slide-coverslip, Leja®10 and 20 on sperm movement. The use of slide-coverslip was superior to maintain LIN and WOB (P<0.05). The aim of the third experiment was to evaluate the effect of 25, 50 and 100x106 sperm/mL concentration on sperm movement. Concentrations of 25 and 50x106 sperm/mL were greater than 100x106 to preserve LIN, STR and BCF and did not adversely affect motility (P<0.05). The aim of the fourth experiment was to evaluate the effect of BotuCrio®, BotuSêmen®, TALP sperm and physiological solution on sperm movement. BotuCrio® was superior among other extenders in preserving BCF and hyperactive (P<0.05). It is concluded that the use of the frame acquisition rate between 25 and 50 Hz; the deposition of semen between slide and coverslip and new dilution in the freezing extender to 25-50x106 of sperm/mL is ideal to reliably evaluate cryopreserved equine semen by SCA®.(AU)

Caracterización de la calidad del semen en hombres atendidos en un centro de reproducción asistida en Guayaquil, Ecuador / Description of the semen quality from men treated in an assisted reproduction center in Guayaquil, Ecuador

RESUMEN Con el objetivo de caracterizar la calidad seminal de hombres en un centro de reproducción asistida de la ciudad Guayaquil (Ecuador), se colectaron 204 muestras de semen de pacientes con problemas de fertilidad de entre 20 y 57 años, atendidos entre mayo de 2017 y septiembre de 2018. Se realizó un espermograma básico a cada muestra, siguiendo las recomendaciones del manual para la examinación y procesamiento de semen humano. El 27,4% de las muestras presentó normozoospermia. Dentro de las alteraciones la teratozoospermia fue de 27,9%, oligoteratozoospermia del 8,8%, evidenciándose mayor número en pacientes de 30 a 39 años. Un alto porcentaje de pacientes presentan una calidad del semen y morfología espermática por debajo los limites de referencia establecidos por la Organización Mundial de la Salud.

ABSTRACT In order to characterize the quality of semen from men in an assisted reproduction center in the city of Guayaquil (Ecuador), 204 semen samples were collected from patients with fertility disorders aged 20 to 57 years, who were admitted between May 2017 and September 2018. A basic spermogram was performed on each sample, following the fabricant recommendations for the examination and processing of human semen. It was found that 27.4% of the samples presented normozoospermia. Among the disorders, it was found that 27.9% had teratozoospermia, 8.8% had oligoteratozoospermia and a higher number of patients were found to be between 30 and 39 years old. A high percentage of patients presented sperm morphology and quality values below the reference limits established by the World Health Organization.

Complicaciones en embarazos logrados por reproducción asistida / Complications in pregnancies achieved by assisted reproduction

Resumen Introducción: Se ha documentado que los embarazos por técnicas de reproducción asistida (TRA) presentan mayor riesgo de efectos adversos. Objetivo: Proporcionar evidencia de las complicaciones obstétricas y perinatales asociadas a concepciones mediante TRA versus embarazos espontáneos. Método: Revisión de artículos originales publicados entre 2010 y 2018, que abordan complicaciones obstétricas y perinatales de mayor frecuencia en embarazos por fertilización in vitro (FIV) e inyección intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI) comparados con concepciones espontáneas. Resultados: Se incluyeron 37 artículos originales, 26 de cohortes y 11 de casos y controles. Las concepciones por FIV e ICSI se asociaron con más complicaciones obstétricas y perinatales como bajo peso al nacimiento, prematuridad, menor peso para la edad gestacional, ingreso a la unidad de cuidados intensivos neonatales, malformaciones congénitas, cesárea, ruptura prematura de membranas, entre otras. Conclusiones: Las concepciones por TRA se asocian con mayor riesgo de complicaciones obstétricas y perinatales en comparación con las espontáneas. Es necesario realizar estudios adicionales que determinen qué aspectos derivan en mayor riesgo.

Abstract Introduction: Pregnancies resulting from assisted reproductive technologies (ART) have been documented to have a higher risk of adverse effects. Objective: To provide evidence on obstetric and perinatal complications associated with conceptions by ART versus spontaneous pregnancies. Method: Comprehensive review of original articles published between 2010 and 2018 addressing the most common obstetric and perinatal complications in pregnancies resulting from in vitro fertilization (IVF) and intracytoplasmic sperm injection (ICSI) in comparison with spontaneous conceptions. Results: Thirty-seven original articles, which reported on 26 cohort studies and 11 case-control trials, were included. IVF and ICSI conceptions were associated with a larger number of obstetric and perinatal complications such as low birth weight, prematurity, low weight for gestational age, admission to the neonatal intensive care unit, congenital malformations, C-section and premature rupture of membranes, among others. Conclusions: Pregnancies by ART are associated with an increased risk of obstetric and perinatal complications in comparison with spontaneous conceptions. Further research is needed to determine which aspects result in higher risk.

Addition of synthetic amino acids in sheep semen improves its quality after cryopreservation / Adição de aminoácidos sintéticos no sêmen ovino melhora a qualidade espermática após a criopreservação do sêmen

Some amino acids can protect mammalian sperm cells against oxidation during thermal stress caused by freezing/thawing. Thus, the objective was to evaluate the protective action of the association of the amino acids L-proline (Pro) and L-glutamine (Glu) against the cryoinjury caused to sheep sperm after cryopreservation. Eight ejaculates were collected from four sheep (n=32) and diluted in Tris-Egg Yolk-Glycerol until the final concentration of 200 x106 sptz/mL and kept in a water bath at 32 °C. The amino acids were added as follows: control (without adding amino acids), Pro+Glu 1 (100 µM Pro + 500 µM Glu), Pro+Glu 2 (300 µMPro + 1000 µM Glu), Pro+Glu 3 (500 µM Pro + 1500 µM Glu) and Pro+Glu 4 (700 µM Pro + 2000 µM Glu). Afterwards, the semen was cooled to 5 °C for 2 h, after that period, filled in 0.5 mL straws and then placed under liquid nitrogen vapor (N2L), 8 cm from the liquid sheet for 15min, and then immersed on the N2L. The samples were analyzed for sperm motility, plasma membrane and acrosomal membrane integrity, mitochondrial activity and binding test. The variables were subjected to the normality tests (Lilliefors test) and homoscedasticity tests (Cochran and Bartlett test), afterwards the variables of normal distribution were subjected to analysis of variance and the means compared by the Tukey test with a significance level of 5%. The Pro+Glu 3 group exhibited sperm with a greater (P<0.05) motility after thawing. In addition, the highest percentage of plasma and acrosomal membrane integrity were obtained using Pro+Glu 1, Pro+Glu 2 and Pro+Glu 3; and Pro+Glu 2 and Pro+Glu 3, respectively. Amino acids also kept mitochondrial activity high compared to the control, with Pro+Glu 3 resulting in greater activity (P<0.05). Sperm viability was higher (P<0.05) with the use of Pro+Glu 2 and Pro+Glu 3 than in the control. The number of sperm that showed the ability to bind to the egg yolk perivitelline membrane was higher (P<0.05) in semen treated with amino acids. It is concluded that the addition of synthetic amino acids in the semen of sheep before cryopreservation improves sperm quality and fertilization potential and can thus be added in cryopreservation protocols.

Alguns aminoácidos podem proteger as células espermáticas de mamíferos contra a oxidação durante o estresse térmico causado na congelação/descongelação. Dessa forma, objetivou-se avaliar a ação protetora da associação dos aminoácidos L-prolina (Pro) e L-glutamina (Glu) contra as crioinjúrias causadas aos espermatozoides de ovino após a criopreservação. Foram coletados oito ejaculados de quatro carneiros (n=32) e diluídos em Tris-Gema de ovo-Glicerol até a concentração final de 200 x106 sptz/mL e, mantidos em banho maria a 32 °C. Os aminoácidos foram adicionados da seguinte forma: controle (sem adição de aminoácidos), Pro+Glu 1 (100 µM Pro + 500 µM Glu), Pro+Glu 2 (300 µM Pro + 1000 µM Glu), Pro+Glu 3 (500 µM Pro + 1500 µM Glu) e Pro+Glu 4 (700 µM Pro + 2000 µM Glu). Depois, o sêmen foi resfriado a 5 °C por 2 h, após esse período, envasado em palhetas de 0,5 mL e então acondicionado sob vapor de nitrogênio líquido (N2L), a 8 cm da lâmina líquida por 15 min, e depois imersos no N2L. As amostras foram analisadas quanto à motilidade espermática, integridade da membrana plasmática e da membrana acrossomal, atividade mitocondrial e teste de ligação. As variáveis foram submetidas aos testes de normalidade (Teste de Lilliefors) e homocedacidade (Teste de Cochran e Bartlett), posteriormente as variáveis de distribuição normal foram submetidas à análise de variância e as médias comparadas pelo teste de Tukey com nível de significância de 5%. O grupo Pro+Glu 3 exibiu espermatozoides com uma maior (P<0,05) motilidade após o descongelamento. Além disso o maior percentual de integridade da membrana plasmatica e acrossomal foram obtidos utilizando Pro+Glu 1, Pro+Glu 2 e Pro+Glu 3; e Pro+Glu 2 e Pro+Glu 3, respectivamente. Os aminoácidos também mantiveram alta a atividade mitocondrial em comparação com o controle, com Pro+Glu 3 resultando numa maior atividade (P<0,05). A viabilidade dos espermatozoides foi maior (P<0,05) com o uso de Pro+Glu 2 e Pro+Glu 3 do que no controle. O número de espermatozoides que apresentaram à capacidade de ligação a membrana perivitelina da gema de ovo foi maior (P<0,05) no sêmen tratado com aminoácidos. Conclui-se que, a adição dos aminoácidos sintéticos no sêmen de ovinos antes da criopreservação melhora a qualidade espermática e o potencial fecundante, podendo assim serem adicionados em protocolos de criopreservação.

Effect of refrigeration at -1°C on spermatozoa quality of domestic cats / Efeito da refrigeração a -1°C na qualidade de espermatozoides de gatos domésticos

The objective of this study was to evaluate the sperm quality obtained of domestic cats by electroejaculation and recovery of the tail of the epididymis after cooling at -1°C and 4°C for 24 and 48 hours. Twenty-nine adult cats (2 to 6kg) were used. Sperm collection was performed by electroejaculation (EEJ), and after 48 hours, the cats were orchiectomized, and sperm sample was obtained from the vas deferens and epididymis tail (EPD). The samples were diluted in ACP-117® extender, and the sperm characteristics were evaluated at three different moments: when still fresh, 24 and 48 hours after cooling. The objective of this study was to evaluate the sperm quality obtained of domestic cats by electroejaculation and recovery of the tail of the epididymis after cooling at -1°C and 4°C for 24 and 48 hours. Twenty-nine adult cats (2 to 6kg) were used. Sperm collection was performed by electroejaculation (EEJ), and after 48 hours, the cats were orchiectomized, and sperm sample was obtained from the vas deferens and epididymis tail (EPD). The samples were diluted in ACP-117® extender, and the sperm characteristics were evaluated at three different moments: when still fresh, 24 and 48 hours after cooling. In order to compare the two refrigeration temperatures, the first stage was to analyze if there was a difference between the harvesting techniques. After this, two experiments were conducted: in the first, sperm sample from 14 cats were used and the cooling was performed at -1°C; and in the second, sample from 15 cats were used and the sperm were refrigerated at 4°C. Sperm kinetics were evaluated by computerized analysis (CASA) and concentration by Neubauer chamber, spermatic morphology was evaluated by modified Karras staining, and membrane integrity was evaluated by eosin nigrosine. The results obtained were analyzed in R software, version 3.2.5 using the Mann-Whitney test for variables with abnormal distributions, considering significance at the level of 5%. In ejaculate samples, higher values of total morphological defects were observed after 24 and 48 hours of refrigeration at 4°C (P<0.022) compared to refrigeration at -1°C, using Friedman test. To quantify the decrease in sperm quality, parameter reductions were calculated among time points (F-24h/F-48h/24h-48h). In EPD samples, a greater reduction in sperm quality was detected after 24 hours of refrigeration at 4°C, both in motility and sperm kinetics and in the movement and velocity indices, compared to refrigeration at -1°C. Based on the results, it can be concluded that cooling of feline spermatozoa at -1°C for up to 48 hours was efficient in maintaining spermatic quality collected by EEJ and EPD, and it could be an alternative to spermatozoa cryopreservation in domestic felines.(AU)

O objetivo deste trabalho foi avaliar a qualidade espermática de gatos domésticos obtidos por eletroejaculação e recuperação da cauda do epidídimo após a refrigeração a -1°C e a 4°C por 24 e 48 horas. Vinte e nove gatos adultos (2 a 6kg) foram utilizados. A colheita de espermatozoides foi realizada por eletroejaculação (EEJ) e, após 48 horas, os gatos foram orquiectomizados, e as amostras espermáticas foram obtidas a partir do ducto deferente e da cauda do epidídimo (EPD). As amostras foram diluídas em ACP-117® e as características espermáticas foram avaliadas em três momentos distintos: fresco, 24 e 48 horas após a refrigeração. Para ser possível comparar as duas temperaturas de refrigeração, a primeira etapa foi analisar se havia diferença entre as técnicas de colheita. Após isto, dois experimentos foram conduzidos: no primeiro, espermatozoides de 14 gatos foram utilizados e a refrigeração foi realizada a -1°C; e no segundo, amostras de 15 gatos foram utilizados e os espermatozoides foram refrigerados a 4°C. A cinética espermática foi avaliada por análise computadorizada (CASA), a concentração por câmara de Neubauer, a morfologia espermática foi avaliada pela coloração de Karras modificada, e a integridade da membrana foi avaliada por eosina nigrosina. Os resultados obtidos foram analisados no software R, versão 3.2.5, utilizando o teste de Mann-Whitney para variáveis com distribuições anormais, considerando significância ao nível de 5%. No ejaculado, maiores valores de defeitos morfológicos totais foram observados após 24 e 48 horas de refrigeração a 4°C (P<0,022) em comparação com refrigeração a -1°C, usando o teste de Friedman. Para quantificar a diminuição na qualidade espermática, as reduções dos parâmetros foram calculadas entre os pontos de tempo (F-24h/F-48h/24h-48h). Na EPD, uma maior redução na qualidade espermática foi detectada após 24 horas de refrigeração a 4°C, tanto na motilidade e na cinética espermática quanto nos índices de movimento e velocidade, em comparação com a refrigeração a -1°C. Com base nos resultados, pode concluir-se que a refrigeração dos espermatozoides felino a -1°C, até 48 horas, foi eficaz na manutenção da qualidade espermático colhidos por EEJ e EPD, e pode ser uma alternativa para a criopreservação de espermatozoides em felinos domésticos.(AU)

Addition of synthetic amino acids in sheep semen improves its quality after cryopreservation / Adição de aminoácidos sintéticos no sêmen ovino melhora a qualidade espermática após a criopreservação do sêmen

Some amino acids can protect mammalian sperm cells against oxidation during thermal stress caused by freezing/thawing. Thus, the objective was to evaluate the protective action of the association of the amino acids L-proline (Pro) and L-glutamine (Glu) against the cryoinjury caused to sheep sperm after cryopreservation. Eight ejaculates were collected from four sheep (n=32) and diluted in Tris-Egg Yolk-Glycerol until the final concentration of 200 x106 sptz/mL and kept in a water bath at 32 °C. The amino acids were added as follows: control (without adding amino acids), Pro+Glu 1 (100 M Pro + 500 M Glu), Pro+Glu 2 (300 M Pro + 1000 M Glu), Pro+Glu 3 (500 M Pro + 1500 M Glu) and Pro+Glu 4 (700 M Pro + 2000 M Glu). Afterwards, the semen was cooled to 5 °C for 2 h, after that period, filled in 0.5 mL straws and then placed under liquid nitrogen vapor (N2L), 8 cm from the liquid sheet for 15 min, and then immersed on the N2L. The samples were analyzed for sperm motility, plasma membrane and acrosomal membrane integrity, mitochondrial activity and binding test. The variables were subjected to the normality tests (Lilliefors test) and homoscedasticity tests (Cochran and Bartlett test), afterwards the variables of normal distribution were subjected to analysis of variance and the means compared by the Tukey test with a significance level of 5%. The Pro+Glu 3 group exhibited sp

Alguns aminoácidos podem proteger as células espermáticas de mamíferos contra a oxidação durante o estresse térmico causado na congelação/descongelação. Dessa forma, objetivou-se avaliar a ação protetora da associação dos aminoácidos L-prolina (Pro) e L-glutamina (Glu) contra as crioinjúrias causadas aos espermatozoides de ovino após a criopreservação. Foram coletados oito ejaculados de quatro carneiros (n=32) e diluídos em Tris-Gema de ovo-Glicerol até a concentração final de 200 x106 sptz/mL e, mantidos em banho maria a 32 °C. Os aminoácidos foram adicionados da seguinte forma: controle (sem adição de aminoácidos), Pro+Glu 1 (100 μM Pro + 500 μM Glu), Pro+Glu 2 (300 μM Pro + 1000 μM Glu), Pro+Glu 3 (500 μM Pro + 1500 μM Glu) e Pro+Glu 4 (700 μM Pro + 2000 μM Glu). Depois, o sêmen foi resfriado a 5 °C por 2 h, após esse período, envasado em palhetas de 0,5 mL e então acondicionado sob vapor de nitrogênio líquido (N2L), a 8 cm da lâmina líquida por 15 min, e depois imersos no N2L. As amostras foram analisadas quanto à motilidade espermática, integridade da membrana plasmática e da membrana acrossomal, atividade mitocondrial e teste de ligação. As variáveis foram submetidas aos testes de normalidade (Teste de Lilliefors) e homocedacidade (Teste de Cochran e Bartlett), posteriormente as variáveis de distribuição normal foram submetidas à análise de variância e as médias comparadas pelo teste de Tukey com nível de significância de 5%. O grupo Pro+Glu 3 exibiu espermatozoides com uma maior (P<0,05) motilidade após o descongelamento. Além disso o maior percentual de integridade da membrana plasmatica e acrossomal foram obtidos utilizando Pro+Glu 1, Pro+Glu 2 e Pro+Glu 3; e Pro+Glu 2 e Pro+Glu 3, respectivamente. Os aminoácidos também mantiveram alta a atividade mitocondrial em comparação com o controle, com Pro+Glu 3 resultando numa maior atividade (P<0,05). A viabilidade dos espermatozoides foi maior (P<0,05) com o uso de Pro+Glu 2 e Pro+Glu 3 do que no controle. O número de espermatozoides que apresentaram à capacidade de ligação a membrana perivitelina da gema de ovo foi maior (P<0,05) no sêmen tratado com aminoácidos.

Diluente Tris suplementado com óleo de Mauritia flexuoxa sobre a qualidade do sêmen caprino após a criopreservação / Tris diluent supplemented with Mauritia flexuoxa oil on the quality of goat semen after cryopreservation

Objetivou-se verificar os efeitos, nos parâmetros espermáticos, na integridade mitocondrial, acrossomal e de membrana em células espermáticas, desencadeados pelo uso do Tris (Tris hidroximetil aminometano) suplementado com óleo de Mauritia flexuoxacomo diluente para criopreservação de sêmen caprino. Quatro caprinos clinicamente saudáveis foram utilizados. Os animais eram alimentados diariamente com volumoso (Pennisetum purpureum, Schum.), concentrado (ração peletizada com teor de 20% proteína, 300 g/animal/dia) e sal mineral específico para Caprinos (Caprinofós®), à vontade. Dois ensaios foram realizados: I ­ Teste de toxicidade; II ­ Criopreservação do sêmen com concentrações ideais. No teste de toxicidade as concentrações avaliadas foram: 5%, 10%, 15% e 20% de diluente a base de óleo de Mauritia flexuoxa. Após o teste de toxicidade, foi escolhido a concentraçãoque apresentou o melhor resultado (5%). Logo após, foram realizadas mais 32 coletas, que foram diluídas em Tris-gema-glicerol (grupo controle) ou diluente contendo óleo vegetal (Mauritia flexuoxa). As amostras foram criopreservadas com auxílio do aparelho Tk3000®. Após o período mínimo de uma semana as palhetas foram descongeladas em banho-maria a 37 °C por 30 segundos, acondicionadas em microtubos de centrifugação e homogeneizadas para a análise imediata de motilidade, vigor espermático e morfologia. Em seguida, por meio de sondas fluorescentes foram avaliadas a integridade de acrossomo, membrana plasmática (Diacetato de Carboxifluresceína e Iodeto de Propídeo) e função mitocondrial sob microscopia de epifluorescência. Quanto a motilidade e vigor, integridade mitocondrial e acrossomal, o grupo buriti foi inferior ao grupo controle. O Tris suplementado com óleo de Mauritia flexuoxa na concentração de 5% não influenciou significativamente a qualidade espermática, porém, observou-se morfologia e integridade de membrana favoráveis. Dessa forma, sendo uma alternativa para substituição de diluentes a base de produtos de origem animal.

The objective was to verify the effects, sperm parameters, mitochondrial, acrosomal and membrane integrity in sperm cells, triggered by the use of Tris (Tris hydroxymethyl aminomethane) supplemented with Mauritia flexuoxa oil as a diluent for cryopreservation of goat semen. Four goats clinically healthy were used. The animals were fed daily with bulky (Pennisetum purpureum, Schum.), concentrate (pelleted feed with 20% protein content, 300 g / animal / day) and mineral salt Specific for Goats (Caprinofós®), ad libitum. Two tests were carried out: I - Toxicity test; II - Semen cryopreservation with ideal concentrations. In the toxicity test as selected were: 5%, 10%, 15% and 20% of Mauritia flexuoxa oil-based diluent. After the toxicity test, the concentration that showed the best result (5%) was chosen. Soon after, a further 32 samples were obtained, which were diluted in Tris-glycerol (control group) or diluent containing vegetable oil (Mauritia flexuoxa). The samples were cryopreserved using the Tk3000® machine. After a minimum of one week, the samples were thawed in a 37 ° C water bath for 30 seconds, packed in centrifugation microtubes and homogenized for immediate analysis of motility, sperm vigor and morphology. Then, by means of fluorescent probes, the integrity of the acrosome, plasma membrane (Carboxyflurescein diacetate and Propidium Iodide) and mitochondrial function under epifluorescence microscopy were evaluated. As for motility and vigor, mitochondrial and acrosomal integrity, the buriti group was inferior to the control group. Tris supplemented with Mauritia flexuoxa oil at a concentration of 5% did not significantly influence sperm quality, however, favorable motility, morphology and membrane integrity were observed. Thus, being an alternative to replace diluents based on products of animal origin.

Diluente Tris suplementado com óleo de Mauritia flexuoxa sobre a qualidade do sêmen caprino após a criopreservação / Tris diluent supplemented with Mauritia flexuoxa oil on the quality of goat semen after cryopreservation

Objetivou-se verificar os efeitos, nos parâmetros espermáticos, na integridade mitocondrial, acrossomal e de membrana em células espermáticas, desencadeados pelo uso do Tris (Tris hidroximetil aminometano) suplementado com óleo de Mauritia flexuoxa como diluente para criopreservação de sêmen caprino. Quatro caprinos clinicamente saudáveis foram utilizados. Os animais eram alimentados diariamente com volumoso (Pennisetum purpureum, Schum.), concentrado (ração peletizada com teor de 20% proteína, 300 g/animal/dia) e sal mineral específico para Caprinos (Caprinofós®), à vontade. Dois ensaios foram realizados: I – Teste de toxicidade; II – Criopreservação do sêmen com concentrações ideais. No teste de toxicidade as concentrações avaliadas foram: 5%, 10%, 15% e 20% de diluente a base de óleo de Mauritia flexuoxa. Após o teste de toxicidade, foi escolhido a concentração que apresentou o melhor resultado (5%). Logo após, foram realizadas mais 32 coletas, que foram diluídas em Tris-gema-glicerol (grupo controle) ou diluente contendo óleo vegetal (Mauritia flexuoxa). As amostras foram criopreservadas com auxílio do aparelho Tk3000®. Após o período mínimo de uma semana as palhetas foram descongeladas em banho-maria a 37 °C por 30 segundos, acondicionadas em microtubos de centrifugação e homogeneizadas para a análise imediata de motilidade, vigor espermático e morfologia. Em seguida, por meio de sondas fluorescentes foram avaliadas a integridade de acrossomo, membrana plasmática (Diacetato de Carboxifluresceína e Iodeto de Propídeo) e função mitocondrial sob microscopia de epifluorescência. Quanto a motilidade e vigor, integridade mitocondrial e acrossomal, o grupo buriti foi inferior ao grupo controle. O Tris suplementado com óleo de Mauritia flexuoxa na concentração de 5% não influenciou significativamente a qualidade espermática, porém, observouse morfologia e integridade de membrana favoráveis. Dessa forma, sendo uma alternativa para substituição de diluentes a base de produtos de origem animal.

The objective was to verify the effects, sperm parameters, mitochondrial, acrosomal and membrane integrity in sperm cells, triggered by the use of Tris (Tris hydroxymethyl aminomethane) supplemented with Mauritia flexuoxa oil as a diluent for cryopreservation of goat semen. Four goats clinically healthy were used. The animals were fed daily with bulky (Pennisetum purpureum, Schum.), concentrate (pelleted feed with 20% protein content, 300 g / animal / day) and mineral salt Specific for Goats (Caprinofós®), ad libitum. Two tests were carried out: I - Toxicity test; II - Semen cryopreservation with ideal concentrations. In the toxicity test as selected were: 5%, 10%, 15% and 20% of Mauritia flexuoxa oil-based diluent. After the toxicity test, the concentration that showed the best result (5%) was chosen. Soon after, a further 32 samples were obtained, which were diluted in Tris-glycerol (control group) or diluent containing vegetable oil (Mauritia flexuoxa). The samples were cryopreserved using the Tk3000® machine. After a minimum of one week, the samples were thawed in a 37 ° C water bath for 30 seconds, packed in centrifugation microtubes and homogenized for immediate analysis of motility, sperm vigor and morphology. Then, by means of fluorescent probes, the integrity of the acrosome, plasma membrane (Carboxyflurescein diacetate and Propidium Iodide) and mitochondrial function under epifluorescence microscopy were evaluated. As for motility and vigor, mitochondrial and acrosomal integrity, the buriti group was inferior to the control group. Tris supplemented with Mauritia flexuoxa oil at a concentration of 5% did not significantly influence sperm quality, however, favorable motility, morphology and membrane integrity were observed. Thus, being an alternative to replace diluents based on products of animal origin.

Does supplementation of vitamin C, reduced glutathione or their association in semen extender reduce oxidative stress in bovine frozen semen? / A suplementação de vitamina C, glutationa reduzida ou sua associação no diluidor de sêmen reduz o estresse oxidativo no sêmen congelado bovino?

The aim of this study was to evaluate the addition of vitamin C, reduced glutathione and the association thereof to the bovine semen cryopreservation extender. The ejaculate from nine bulls were divided into four fractions, each corresponding to a treatment, namely: control group-semen diluted with Tris-yolk extender; vitamin C group-semen diluted in Tris-yolk extender supplemented with vitamin C (2.5mmol/mL); glutathione group-semen diluted in Tris-yolk extender supplemented with reduced glutathione (2.5mmol/mL) and associated group-semen diluted in Tris-yolk extender supplemented with vitamin C (1.25mmol/mL) and reduced glutathione (1.25mmol/mL). Afterwards, the semen was packed into French straws and submitted to cryopreservation using automated equipment. After cryopreservation, the semen was thawed and evaluated considering sperm motility, morphology, plasma membrane, acrosome, mitochondrial potential and oxidative stress, as well as the thermo resistance test. Extender's supplementation with the association of vitamin C and reduced glutathione showed benefic effects on sperm motility and preservation of plasma and acrosomal membranes during semen cryopreservation, being also the group that showed higher values of reactive oxygen species. Thus, the association of both antioxidants contributed to the preservation of sperm cells in every analyzed characteristic, suggesting its use on bovine semen cryopreservation.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar a adição de vitamina C, glutationa reduzida e sua associação ao diluidor de criopreservação de sêmen bovino. O ejaculado de nove touros foi dividido em quatro frações, cada uma correspondendo a um tratamento, a saber: grupo controle - sêmen diluído em Tris-gema; grupo vitamina C - sêmen diluído em Tris-gema, suplementado com vitamina C (2,5mmol/mL); grupo glutationa - sêmen diluído em Tris-gema, suplementado com glutationa reduzida (2,5mmol/mL) e grupo sêmen associado - diluído em Tris-gema, suplementado com vitamina C (1,25mmol/mL) e glutationa reduzida (1,25mmol/mL ). Posteriormente, o sêmen foi envasado em palhetas francesas e submetido à criopreservação por meio de equipamento automatizado. Após a criopreservação, o sêmen foi descongelado e avaliado quanto à motilidade espermática, à morfologia, à membrana plasmática, ao acrossoma, ao potencial mitocondrial e ao estresse oxidativo, bem como pelo teste de resistência térmica. A suplementação de extensor com a associação de vitamina C e glutationa reduzida mostrou efeitos benéficos sobre a motilidade espermática e a preservação das membranas plasmática e acrossomal durante a criopreservação de sêmen, sendo também o grupo que apresentou maiores valores de espécies reativas de oxigênio. Assim, a associação de ambos os antioxidantes contribuiu para a preservação dos espermatozóides em todas as características analisadas, sugerindo sua utilização na criopreservação de sêmen bovino.(AU)

Antioxidant effect on viability of boar semen cooled to 15°C / Influência de antioxidantes na viabilidade do sêmen suíno resfriado a 15°C

This study aimed to evaluate the addition of Vitamin C, reduced Glutathione and trolox on sperm characteristics of pork refrigerated semen. Six pigs were collected through the technique of gloved hand (10 ejaculates/animals). The semen was diluted in MR-A®. After the previous evaluations, the treatments were added: Control group: diluent only; Vitamin C Group: 200µM/mL Vitamin C; Trolox Group: 200µM/mL Trolox; Glutathione group: 2.5mM/ml Reduced glutathione. The semen was stored in thermal boxes and placed inside the refrigerator at 15oC and evaluated at D0, 12, 48, 72 hours. After 30 hours of incubation, each treatment was divided into two equal fractions and the same concentration of antioxidants was added in one of the parts. The results show that reduced glutathione supplementation preserves sperm motility after 24 hours but also has a higher percentage of acrosome intact in the presence of this antioxidant. There was no effect of adding a second dose of the antioxidants. In conclusion, the addition of reduced Glutathione to the swine semen diluent is a promising alternative for better preservation of sperm characteristics and the addition of the second dose of antioxidants during storage is detrimental to semen.(AU)

Este estudo tem como objetivo avaliar a adição da vitamina C, da glutationa reduzida e do trolox sobre características espermáticas do sêmen refrigerado de suínos. Seis cachaços foram coletados pela técnica de mão enluvada (10 coletas/animal). O sêmen foi diluído em MR-A®. Após as avaliações prévias, os tratamentos foram adicionados: grupo controle: apenas diluidor; grupo vitamina C: 200µM/mL de vitamina C; grupo trolox: 200µM/mL de trolox; grupo glutationa: 2.5mM/mL de glutationa reduzida. O sêmen foi armazenado em caixas térmicas e alocado dentro do refrigerador a 15oC e avaliado nos tempos zero, 12, 48 e 72 horas . Após 30 horas de incubação, cada tratamento foi dividido em duas frações iguais e adicionou-se a mesma concentração de antioxidantes em uma das partes. Os resultados demonstram que a suplementação de glutationa reduzida preserva a motilidade espermática após 24 horas, bem como tem maior percentual de acrossoma intacto na presença desse antioxidante. Não houve efeito ao se adicionar uma segunda dose dos antioxidantes. Em conclusão, o acréscimo da glutationa reduzida ao diluidor de sêmen suíno é uma alternativa promissora para melhor preservação das características espermáticas, e a adição da segunda dose dos antioxidantes durante o armazenamento é prejudicial ao sêmen.(AU)

Efecto del Cigarrillo Electrónico sobre los Espermatozoides Humanos: Aproximación in vitro / Effect of Electronic Cigarette on Human Sperm: in vitro Approximation

Introducción Los cigarrillos electrónicos (E-Cig) aparecieron en el mercado hace 15 años como una alternativa para combatir el consumo de tabaco, un problema de salud pública, sin embargo, su efecto sobre la salud reproductiva no ha sido completamente evaluado. El objetivo del presente estudio, fue evaluar los efectos de los E-Cig sobre los espermatozoides humanos in vitro. Métodos Un dispositivo para incubar en contacto directo a los espermatozoides con el vapor a partir de dos esencias diferentes (TNT y Sugar Drizzle), el humo del cigarrillo o aire como control negativo fue construido. Adicionalmente, usando el mismo dispositivo, se elaboró el extracto a partir del aire, de las dos esencias con el E-Cig y con el cigarrillo Piel Roja sin filtro en medio para incubar en contacto indirecto con los espermatozoides. Resultados Se observó disminución de la movilidad con el E-Cig en más del 38% en el tiempo y una disminución de la viabilidad en más del 18% que se mantenían con el tiempo mientras que con el cigarrillo convencional afectaba la movilidad y la viabilidad en casi el 100%. Finalmente se encontró que se afecta más la movilidad de los espermatozoides con la esencia de Sugar Drizzle que contaba con menos concentración de nicotina que con la esencia de TNT. Conclusiones En conclusión, tanto el cigarrillo convencional como el E-Cig afectan los parámetros seminales (movilidad y viabilidad), y se postula que el uso del E-Cig, aunque es menos citotóxico y afecta menos que el cigarrillo convencional, también puede generar a largo plazo problemas de infertilidad.

Introduction Electronic cigarettes (E-Cig) appeared in the market 15 years ago as an alternative to combat tobacco use, a public health problem, however, its effect on reproductive health has not been fully evaluated. The objective of the present study was to evaluate the effects of E-Cig on human sperm in vitro. Methods A device to incubate sperm in direct contact with steam from two different scents (TNT and Sugar Drizzle), cigarette smoke or air as a negative control was built. Additionally, using the same device, extracts were elaborated from the air, from the two essences with the E-Cig and with the Red Skin cigarette without a filter in the medium to incubate in indirect contact with sperm cells. Results Decreased motility with E-Cig was observed in more than 38% over time and a decrease in viability in more than 18% that was maintained over time while with the conventional cigarette affected motility and viability in almost 100%. Finally, we found that sperm motility of the sperm is more affected with the essence of Sugar Drizzle that had less nicotine concentration than with TNT essence. Conclusions In conclusion, both the conventional cigarette and the E-Cig affect the seminal parameters (motility and viability) and it is postulated that the use of the E-Cig, although it is less cytotoxic and affects less than the conventional cigarette can also generate long-term infertility problems

El glifosato afecta negativamente a los espermatozoides humanos: evidencia in vitro / Glyphosate Negatively Affects Human Sperm: in vitro evidence

Determinar el efecto del glifosato sobre la calidad seminal en humanos a través de una revisión sistemática. Se realizó una búsqueda de la literatura en dos bases de datos (Pubmed y Scopus) de los terminos glyphosate/gliphosate/Roundup/yerbimat y sperm/"male reproductive tract". Los criterios de selección permitieron analizar tres artículos sobre el efecto del glifosato sobre los espermatoozides humanos. Se observó un efecto de negativo del glifosato sobre los espermatoozides humanos (movilidad, actividad mitocondrial y DNA). Aunque son pocos los artículos que evalúan el efecto del glifosfato sobre la calidad seminal, todos concluyen en sus repercusiones negativas. Investigaciones sobre el tema se requieren especialmente ahora que el Gobierno Nacional pretende implementar su uso

To determine the effect of glyphosate on seminal quality in humans through a systematic review. Two databases (Pubmed and Scopus) were searched for potentially relevant publications about glyphosate/gliphosate/Roundup/yerbimat and sperm/"male reproductive tract". Selection criteria allowed analyzing three articles on the effect of glyphosate on human spermatozoa. An adverse effect of glyphosate was observed on human spermatozoa (mobility, mitochondrial activity, and DNA). Although few articles evaluate the effect of glyphosate on seminal quality, all conclude in its negative repercussions. Research on the subject is especially needed now that the National Government intends to implement its use.